DNA分子克隆技術是分子生物學研究的基礎，其創新和發展直接推動著分子生物學的進步。目前國內外使用的分子克隆方法有多種，各有優缺點，分子克隆領域尚未形成一種標準化的方法，且試劑盒價格昂貴。中國熱帶農業科學院研究人員日前開發了一種新型的實用分子克隆技術Nimble Cloning(簡稱NC克隆技術)，能將目標DNA通過一步反應直接克隆到環狀目標載體。
該技術論文近期發表在國際期刊《生物工程與生物技術前沿》(Frontiers in Bioengineering and Biotechnology)，中國熱帶農業科學院生物所言普副研究員和周鵬研究員為該文通訊作者。
言普介紹，NC克隆技術與現有分子克隆技術相比，具有以下優點：一是直接將DNA克隆到環狀載體，避免了載體的線性化酶切和回收等步驟，不僅簡化了實驗操作，還提高了克隆效率。二是使用靈活，用途廣泛。基因擴增技術(PCR)產物和環狀質粒上的DNA均可克隆到目標載體，并且可用于單片段、多片段和多位點等多種形式的克隆。三是可靈活用于標準化克隆和無縫克隆。基因加帶通用接頭序列后可克隆到系統任何一個載體，形成一個標準化的克隆系統。如有不使用通用接頭序列的無縫克隆要求，只需將目標基因與載體的重疊序列設計在通用接頭的外圍，通用接頭可在克隆反應中消除，在不改變載體的情況下實現無縫克隆。
為了方便NC克隆技術的推廣使用，言普等還構建了一系列配套的系統表達載體，包括原核表達、酵母雙雜交、植物過表達、植物RNAi、植物亞細胞定位、植物BiFC、植物基因編輯、植物VIGS、哺乳動物表達載體等，初步形成了一個標準化的克隆系統，為基因功能研究提供了一個便利的技術平臺。該套載體向科研人員開放共享，可免費索取使用。
據悉，該技術已在中科院華南植物園、華南農業大學、華中農業大學、四川農業大學、東北林業大學、西北工業大學、揚州大學、海南大學等10多家科研單位使用，取得了良好的使用效果，有望成為分子克隆領域的標準系統。(王祝華)
關鍵詞： 克隆技術
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